Технические данные
Инструкция по эксплуатации колонн/пластин для опреснения с18
Введение в продукт
Опреснительные колонки/пластины C18 заполнены матрицей силикагеля C18, функциональная группа которой, октадецил, обладает высокой гидрофобностью и превосходными свойствами удержания неполярных соединений. Опреснительные колонки/пластины C18 могут адсорбировать молекулы праймера/олиго/ДНК с DMT без удержания соли, что приводит к получению высокочистых продуктов праймера/олиго/ДНК.
Руководство по выбору
BM Life Sciences предлагает колонки/пластины для опреснения C18 различных размеров, и вы можете выбрать нужную колонку для опреснения на основе концентрации праймера/олиго. Для пакетной обработки вы можете выбрать 96-луночную пластину для опреснения.
| Номер продукта | норма | Применимые спецификации олигонуклеотидов | Этапы ссылки |
| SPEC18W150 | 50мг/1мл | 10нмоль - 200нмоль | Шаг 5 |
| SPEC18W3100 | 100мг/3мл | 10нмоль - 600нмоль | Шаг 1 |
| SPEC18W3300 | 300мг/3мл | 10нмоль - 2 .опмоль | Шаг 2 |
| SPEC18W61000 | 1г/6мл | 1 мкмоль - 6 мкмоль | Шаг 3 |
| SPEC18W9630 | 30 мг/96-луночный планшет | 5нмоль - 100нмоль | Шаг 4 |
| SPEC18W9650 | 50 мг/96-луночный планшет | 10нмоль - 200нмоль | Шаг 4 |
| SPE15C18W9680 | 80 мг/96-луночный планшет (1,5 мл 96-луночный планшет) | 10нмоль - 500нмоль | Шаг 5 |
| SPE23C18W9680 | 80 мг/96-луночный планшет (2,3 мл 96-луночный планшет) | 10нмоль - 500нмоль | Шаг 5 |
Примечание
Очищающая колонка/пластина C18 также может обессоливать сырой продукт и праймер/олигомер после очистки с помощью ВЭЖХ и электрофореза в ПААГ, подробности см. в шаге 5.
Реагент
Ацетонитрил хроматографического класса
0,1 М ТЭА, PH7,0
0,5 М NaCl
Промывочный раствор (5% ацетонитрила, растворенного в 0,5 М Nacl)
3% трифторуксусная кислота (ТФУ)
Деионизированная вода
20% ацетонитрила
Буфер TE: 10 ммоль/л Tris-cla, 1 ммоль/л EDTA, PH 8,0
Шаг 1
Подготовка образца
Добавьте 0,5 М NacI к образцу олигонуклеотида до объема 2 мл.
Активация опреснительной колонны
Активация: для активации колонки использовали 1 мл ацетонитрила.
Уравновешивание: уравновесьте колонку с 1 мл 0,1 М раствора TEAA (PH7,0).
Процесс очистки
1. Пропустите 2 мл раствора, содержащего олигонуклеотиды, через опреснительную колонку.
2. Промойте колонку 2 раза 1 мл промывочного раствора для удаления неудачных последовательностей.
3. Промойте колонку 2 раза 1 мл деионизированной воды для удаления солей.
4. Промойте колонку 2 раза 1 мл 3% трифторуксусной кислоты для удаления ДМТ и наблюдайте, как адсорбированный слой становится оранжево-красным; и
5. Дважды промойте обессоливающую колонку 1 мл деионизированной воды для удаления трифторуксусной кислоты и остаточных солей.
6. Элюируйте 1 мл 20% ацетонитрила и соберите.
Шаг 2
Подготовка образца
Добавьте 0,5 М NacI к образцу олигонуклеотида до объема 4 мл.
Активация опреснительной колонны
Активация: для активации колонки использовали 2 мл ацетонитрила.
Уравновешивание: уравновесьте колонку объемом 2 мл с помощью 0,1 М TEAA (PH 7,0).
Процесс очистки
1. Пропустите 4 мл раствора, содержащего олигонуклеотиды, через опреснительную колонку.
2. Промойте колонку 2 раза 2 мл промывочного раствора для удаления неудачных последовательностей.
3. Промойте колонку 2 раза 2 мл деионизированной воды для удаления солей ;)
4. Промойте колонку 2 раза 2 мл 3% трифторуксусной кислоты для удаления ДМТ, адсорбционный слой стал оранжево-красным.
5. Промойте колонку деминерализованной водой дважды по 2 мл деионизированной воды для удаления трифторуксусной кислоты и остаточных солей.
6. Элюируйте 2 мл 20% ацетонитрила и соберите.
Шаг 3
Подготовка образца
Добавьте 0,5 М Nac к образцу олигонуклеотида до объема 10 мл.
Активация опреснительной колонны
Активация: для активации колонки использовали 5 мл ацетонитрила.
Уравновешивание: колонку уравновешивали 10 мл 0,1 м TEAA (PH 7,0).
Процесс очистки
1. 10 мл раствора, содержащего олигонуклеотиды, пропускали через опреснительную колонку.
2. Колонку дважды промывали 5 мл промывочного раствора для удаления неудачных последовательностей.
3. Дважды промойте колонку 5 мл деионизированной воды для удаления солей.
4. Промойте колонку дважды 5 мл 3% трифторуксусной кислоты для удаления ДМТ и обратите внимание, что адсорбционный слой стал оранжево-красным.
5. Дважды промойте колонку 5 мл деионизированной воды для удаления остатков трифторуксусной кислоты и соли.
6. Элюируйте 5 мл 20% ацетонитрила и соберите.
Шаг 4
Подготовка образца
Добавьте 0,5 М Nacl к образцу олигонуклеотида до объема 0,5 мл.
активация 96-луночного планшета
Активация: через каждую лунку 96-луночного планшета пропускали 0,5 мл ацетонитрила.
Равновесие: уравновесьте 96-луночный планшет с помощью 0,5 мл 0,1 М раствора TEAA (pH 7,0).
Процедура очистки
1. Пропустите 0,5 мл раствора, содержащего олигонуклеотиды, через 96-луночный планшет.
2. Промойте 96-луночный планшет 2 раза 0,5 мл промывочного раствора для удаления плохих последовательностей.
3. Промойте 96-луночный планшет 2 раза 0,5 мл деионизированной воды для удаления солей.
4. Промойте 96-луночный планшет 2 раза 0,5 мл 3% трифторуксусной кислоты для удаления ДМТ и наблюдайте, как адсорбционный слой становится оранжево-красным; и
5. Дважды промойте 96-луночный планшет 0,5 мл деионизированной воды для удаления остатков трифторуксусной кислоты и соли.
6. Элюируйте 0,5 мл 20% ацетонитрила и соберите материал.
Шаг 5
Подготовка образца
Добавьте 0,5 М Nacl к образцу олигонуклеотида до объема 1,2/2 мл.
активация 96-луночного планшета
Активация: Пропустите 1–4 мл 0,5 мл ацетонитрила через каждую лунку 96-луночного планшета.
Уравновешивание: уравновесьте 96-луночный планшет с помощью 1–4 мл 0,5 мл 0,1 М раствора TEAA (рН 7,0).
Процесс очистки
1. Пропустите 0,5–2 мл раствора, содержащего олигонуклеотиды, через 96-луночный планшет.
2. Промойте 96-луночный планшет 2 раза 1/2 мл промывочного раствора, чтобы удалить нежелательные последовательности ;)
3. Промойте 96-луночный планшет дважды 1/2 мл деионизированной воды для удаления солей.
4. Дважды промойте 96-луночный планшет 1/2 мл 3% трифторуксусной кислоты для удаления ДМТ и наблюдайте, как адсорбционный слой становится оранжево-красным;
5. Промойте 96-луночный планшет 1/2 мл деионизированной воды 2 раза, чтобы удалить остатки трифторуксусной кислоты и соли.
6. Элюируйте 1/2 мл 20% ацетонитрила и соберите материал.
Шаг 6
Реагент
Ацетонитрил хроматографического класса
0,05 М ТЭА, рН 7,0
2 М ТЭА, PH 7,0
Деионизированная вода (для опреснения и очистки молекул РНК без РНКазы) 60% ацетонитрила (растворенного в воде, содержащей 0,5% NH4OH)
20% ацетонитрила (для обессоливания молекул ДНК или РНК после снятия защиты)
Буфер TE: 10 ммоль/л Tris-cla, 1 ммоль/л EDTA, PH 8,0
Подготовка образца
Очищенный ВЭЖХ олиго: Добавьте соответствующее количество 0,1 М TEAA к очищенным ВЭЖХ олиго так, чтобы конечная концентрация ацетонитрила была ≤5%. Очищенные олиго: Растворите фрагменты геля, содержащие олигонуклеотиды, в 0,05 М TEAA, удалите фрагменты геля, растворите олиго по крайней мере в 2 мл 0,1 М TEAA.
Олигосахариды, растворенные в NH4OH или AMA: выпаривают досуха и растворяют в 2 мл 0,1 М TEAA.
Активация опреснительного насоса
Активация: для активации колонки использовали 1 мл ацетонитрила.
Уравновешивание: уравновесьте колонку 1 мл 2 М TEAA (pH 7,0).
Процедура обессоливания олигосахаридов для очистки методом ВЭЖХ
1. Пропустите раствор, содержащий олигонуклеотиды, через опреснительную колонку.
2. Дважды промойте опреснительную колонку 1 мл деионизированной воды для удаления солей.
3. Элюируют через колонку 1 мл 60% ацетонитрила и собирают.
Процедура обессоливания олигосахаридов, очищенных методом ПААГ
1. Пропустите раствор, содержащий олигонуклеотиды, через опреснительную колонку.
2. Дважды промойте опреснительную колонку 1 мл деионизированной воды для удаления солей.
3. Элюируют через колонку 1 мл 60% ацетонитрила и собирают.
Процедура обессоливания ДНК-олигона после синтеза
1. Пропустить раствор, содержащий олигонуклеотиды, через опреснительную колонку; и
2. Дважды промойте колонку 1 мл 0,1 М TEAA, чтобы удалить неудачные последовательности.
3. Дважды промойте опреснительную колонку 1 мл деионизированной воды, чтобы удалить соли.
4. Пропустите колонку через 1 мл 20% ацетонитрила и соберите.
Процедура обессоливания РНК-олигонуклеотидов после синтеза
1. Пропустите раствор, содержащий олигонуклеотиды, через опреснительную колонку.
2. Промойте колонку 2 мл 0,1 М ТЭАА.
3. Промойте колонку 2 мл воды, свободной от РНКазы.
4. Пропустите 2 мл 20% ацетонитрила (вода без РНКазы) через колонку, элюируйте и соберите. Хранение олигонуклеотидов
Олигонуклеотиды, растворенные в 20% ацетонитриле и хранящиеся при температуре 4°С, предотвращают рост микроорганизмов и подходят для кратковременного хранения.
Олигонуклеотиды в 20% растворе ацетонитрила (или растворенные в щелочном буфере, таком как ТЕ) могут храниться в течение длительного времени при температуре до -20 °C.
Олигонуклеотиды в виде лиофилизированного порошка могут храниться длительное время.
Предупреждение
Используемые количества реагентов являются лишь рекомендациями и должны быть оптимизированы в каждом конкретном случае.
Количества используемых реагентов являются лишь рекомендациями и должны оптимизироваться в каждом конкретном случае.
Колонка для опреснения должна пройти достаточное активационное равновесие для элюирования остатков на колонке/пластине и улучшения связывающей способности колонки/пластины для опреснения. Отбор проб синтезированных олигонуклеотидов следует проводить медленно, чтобы предотвратить попадание порошка CPG в колонку/пластину для очистки и перекрестного загрязнения.
В опреснительных колоннах/пластинах C18 используется кремниевая матрица, допустимый диапазон pH составляет 2–7, при pH > 7,5 кремниевая матрица легко растворяется, при pH
При использовании ТФУ для обессоливания ДМТ обратите внимание на время, слишком долгое время приведет к удалению пурина.
Быть привязанным
B&M Universal CPG Frits Синтез Колонны Технология Быстрого Обессоливания и Очистки
Колонны для синтеза универсальных фритт CPG B&M Технология быстрого опреснения и очистки:
Универсальные фритты CPG компании B&M изготавливаются из импортного сверхвысокомолекулярного сверхчистого полиэтилена и импортного порошка CPG, обработанного по специальной технологии, обладают хорошим эффектом синтеза в синтезирующей колонне, низкой скоростью мутаций и надежным качеством продукции.
После завершения синтеза в синтезаторе серии Dr.Oligo/Mermade и растворения аммиака олиго можно элюировать непосредственно в колонку для синтеза, а после дозирования и слива его можно использовать для рутинной реакции ПЦР напрямую, без дополнительных стадий очистки, что удобно в эксплуатации, экономит затраты и ускоряет доставку!
Конкретные этапы операции следующие:
1. Синтез B&M Universal CPG Frits синтетические колонки/пластины/ы 400 мкл, смесь 75% ацетонитрила и сверхчистой воды, дважды промытая для удаления синтетических остаточных реагентов;
2, универсальные фритты CPG B&M, синтетические колонны/пластины для аммолиза аммиака, 90°C, 80 фунтов/кв. дюйм, аммолиз аммиака 2–2,5 ч;
3, 100% ацетонитрил 400 л промывает синтетическую колонку/пластину, дважды;
4. Смесь сверхчистой воды с 90% ацетонитрилом, 400 мкл, промывка синтетической колонки/пластины, дважды, откачка досуха;
5. Соответствующий объем элюента для элюирования праймеров на синтетической колонке/пластине. Элюентом может быть сверхчистая вода, может быть смесь триэтиламина и сверхчистой воды с 3%, а также может быть смесь ацетонитрила и сверхчистой воды с 20%.
6. Элюирующий раствор можно измерять, дозировать, сливать, упаковывать и отправлять.